- 林波;孟海玲;吴勇;邴晖;长孙东亭;罗素兰;
海兔(Aplysia californica)乙酰胆碱结合蛋白(Ac-AChBP)是研究烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的结构模板之一,它的高效表达对研究神经性相关疾病具有重要的意义。高效表达关键是要有高的转染效率,通过构建含(Ac-AChBP)基因的昆虫杆状病毒表达载体Bcmid,对脂质体转染Bcmid的多个条件进行探索,研究发现,当采用对数生长中期的细胞、细胞密度为2.5×106cells/mL,质粒DNA浓度为4.5×10-2g/mL和脂质体浓度为0.8 mL/L时,转染效率达到较高值,滴度为2×107±10%pfu/mL,同时证明高滴度病毒具有高的表达效率,而且表达蛋白具有生物活性。
2014年01期 v.18;No.76 1-5+38页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K] [下载次数：151 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 季秀玲;陈贵元;林连兵;张琦;魏云林;
从食品冷冻厂样品中筛选得到1株产脂肪酶的低温菌株KM1,经16S rRNA基因序列分析将其初步鉴定为Yersinia enterocolitica的亚种。该低温菌株分泌的胞外脂肪酶Lip-KM1经40%硫酸铵沉淀、超滤浓缩、SephacryTMHRS-100分子筛和Superdex G75凝胶过滤后,得到电泳纯的酶产物,纯化倍数为26倍,回收率为10.3%,相对分子质量约为34.3 kD。在0~25℃和pH 7.2~10范围内均保持良好的催化活性;最适催化温度为37℃,最适pH值为9.0,为典型的低温碱性脂肪酶。
2014年01期 v.18;No.76 6-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 951K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 冯崔香;邓丽刚;闫征;杜国华;王楠;
精氨酸常在重组蛋白的体外复性中,作为一种小分子添加剂用于抑制蛋白聚集。精氨酸对蛋白复性折叠过程本身的影响尚不清楚。首次以不易聚集的牛胰核糖核酸酶为研究对象,通过飞行质谱检测氧化复性中间体的变化,通过酶学活性检测蛋白活性的恢复过程,观察了精氨酸对氧化复性的直接影响。发现不同浓度精氨酸对牛胰核糖核酸酶的氧化复性有直接的抑制作用。特别在0.5 mol/L浓度时,精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的抑制作用具有独特的时相依赖性:早期复性可持续至4 h,其活性恢复达30%后,晚期复性基本终止。这种抑制特征与脲的抑制作用有明显的不同,精氨酸没有完全抑制关键结构中间体的形成。结果说明,牛胰核糖核酸酶的氧化复性,除经关键结构中间体的主要通路外,还可能存在一个潜在复性通路,它是其氧化复性后期的关键限速通路。该复性通路可以被0.5 mol/L精氨酸完全阻断。
2014年01期 v.18;No.76 12-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1336K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 王成爱;赵宏宇;邢永强;邵灵利;蔡禄;
核小体定位对真核生物基因表达调控发挥着重要作用。前期基于核小体核心及连接区域的k-mer频次分布偏好性,构建了位置权重矩阵算法,并在酿酒酵母基因组内较好地预测了核小体占据率。利用该理论模型,以1 bp碱基为步长、147 bp碱基为窗口,用该算法计算了酵母1号、3号、14号染色体上核小体形成能力强、中、弱各3条长度为147 bp的DNA序列,将这些片段克隆到重组质粒中,大量扩增回收9条标记biotin分子的目的序列。同时分别表达纯化了组蛋白H2A、H2B、H3和H4,复性后装配形成组蛋白八聚体结构。利用盐透析方法将9条DNA序列在体外组装形成核小体结构,经biotin标记检测后计算了反应过程的吉布斯自由能,对比了9条目的序列形成核小体的亲和力大小。研究发现,9条序列中有5条序列与理论预测完全符合,4条序列与理论预测不完全一致。实验结果与该算法预测的核小体定位结果基本一致,表明该理论模型能够有效预测酿酒酵母基因组核小体占据水平。
2014年01期 v.18;No.76 21-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1313K] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：2 ] - 贾小娜;陈格飞;孟清;
蜘蛛丝是天然的生物材料,具有潜在的巨大应用价值。研究蜘蛛丝蛋白质的结构与功能,有助于破解蜘蛛丝蛋白质的成丝机理,为制备优良材料学性能的仿生蜘蛛丝纤维提供理论依据。以MiSp蜘蛛丝的重复区和C端非重复区蛋白多肽为研究对象,在不同pH值和离子条件下,在体外研究其二级结构与成丝的关系。CD图谱显示:表达纯化的重组蜘蛛丝蛋白R1R2在pH 7.5、6.5和5.5时二级结构相似,均为无规则卷曲,而R1R2CT则主要呈现为α螺旋构象;扫描电镜结果表明:在以上3种pH条件下,只有pH 5.5时R1R2和R1R2CT才形成重组丝纤维,R1R2CT纤维形态较平整,类似于天然蛛丝纤维形态,而R1R2丝纤维则呈条带状,表面粗糙。另外,氯化钠不利于形成形态平整的丝纤维。该成果为研究蛛丝蛋白的成丝机理奠定基础,也为制备仿生蛛丝蛋白纤维提供理论依据。
2014年01期 v.18;No.76 28-32+49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1469K] [下载次数：176 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 谷丰;朱国东;张琦;季秀玲;魏云林;林连兵;
病毒和宿主之间的密码子使用频率差异是病毒在宿主中生存的重要调控机制之一。利用生物学软件Editseq和RSCU算法统计病毒STSV2及其宿主Sulfolobussolfataricus P2中的6个不同基因的遗传密码偏嗜性,并对病毒STSV2的dUTPase在大肠杆菌BL21和Rosetta中分别进行外源表达并分析其差异。结果表明,病毒STSV2密码子的偏嗜性总体与其宿主菌P2相似,STSV2基因组的不同蛋白编码基因的密码子偏嗜性有区别,病毒和宿主的相似蛋白编码序列密码子偏嗜性也有差异。分别以BL21(DE3)和Rosetta(DE3)为宿主表达STSV2的dUTPase基因显示,以BL21(DE3)为宿主时表达量大于以Rosetta(DE3)为宿主时目的蛋白表达量,进一步说明了病毒STSV2的密码子的偏嗜性对其蛋白的外源表达影响。
2014年01期 v.18;No.76 33-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 1318K] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：2 ] - 谢震渊;方芳;沈谊清;吴金妍;陈则;郑眉;
2009年"甲型H1N1流感"全球流行导致了数以万计人的死亡。疫苗的及时研制为预防、控制甲流的传播,减少发病率和死亡率做出了重大贡献。甲流疫苗辅以佐剂滴鼻免疫能更好地抵御甲流攻击。将A/California/7/2009(H1N1)裂解疫苗辅以化合物48/80(C48/80)佐剂滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,免疫一次,免疫后28 d,小鼠用致死剂量的同源病毒进行攻击。结果发现,滴鼻免疫组的抗体滴度均达到很高的水平,而且随着H1N1裂解疫苗剂量的增加,其对小鼠的保护作用越强,同时添加佐剂可以更有效提高H1N1裂解疫苗的保护效果。实验结果说明H1N1裂解疫苗辅以C48/80佐剂滴鼻免疫能够保护小鼠免受流感病毒的感染。
2014年01期 v.18;No.76 39-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 1395K] [下载次数：229 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 王建军;唐新;储强;顾涛;汪小葛;张庆慧;徐姿;
巨噬细胞分泌的纤维细胞生长因子-7(fibroblast growth factor-7,FGF-7)具有一定的细胞修复作用及抗炎症作用。通过PCR技术、Western-blot及ELISA实验研究分析FGF-7在巨噬细胞感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.avium)后的分子免疫机制。研究发现fgf-7基因在结核病患者外周血单个核细胞中表达增强,并且U973巨噬细胞在感染M.avium后,其fgf-7基因与FGF-7蛋白亦表达增强,同时U973巨噬细胞上清中的细胞因子TNF-α与IFN-γ分泌量显著增加。实验结果表明巨噬细胞受M.avium感染后,M.avium可增强巨噬细胞fgf-7基因及其蛋白质的表达,并促进细胞因子TNF-α与IFN-γ的分泌;提示FGF-7可能与TNF-α、IFN-γ等共同引起炎症反应从而参与对M.avium的抑制或杀伤作用,并修复损伤的巨噬细胞。
2014年01期 v.18;No.76 45-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1448K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 孙晓东;王珺;桑明;王燕;罗超;余明华;
观察褪黑素以及褪黑素联合顺铂是否可以抑制A549细胞增殖并促进细胞凋亡,探讨ERK1/2MAPK信号通路在这一过程中的作用,为肺腺癌的研究提供实验依据。用不同浓度的褪黑素、不同浓度的顺铂、褪黑素联合顺铂刺激体外培养的肺腺癌细胞系A549细胞,MTT法检测各组细胞的活性,运用Real-time RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p53的表达水平,Western-blot检测ERK1/2MAPK的活性变化。结果:1)单纯使用褪黑素和顺铂均可抑制A549细胞增殖,褪黑素联合顺铂时,抑制作用更加显著,一定浓度的褪黑素可降低顺铂的使用浓度;2)未经处理的A549细胞Bcl-2/Bax很高,p53基因表达较低,经褪黑素以及褪黑素联合顺铂刺激后A549细胞中Bcl-2/Bax明显下降,p53基因表达明显升高,并有浓度依赖;3)经褪黑素和顺铂刺激后A549细胞中磷酸化ERK1/2MAPK水平明显降低。褪黑素联合顺铂可抑制A549细胞增殖并且诱导凋亡相关基因表达,褪黑素和顺铂对A549细胞的抑制作用可能与ERK1/2MAPK信号通路有关。
2014年01期 v.18;No.76 50-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 1508K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ]
- 刘琳;陈水琴;胡志敏;项林平;厉坤鹏;董军磊;张尔力;欧元;赵兴春;叶健;
性侵犯案件中精阴混合斑的分离一直是法庭科学物证检验中的难点.现依据分离原理的不同,将各种精子细胞分离方法分为非免疫学方法与免疫学方法,同时对各方法的优缺点进行概述,进而总结精子细胞分离方法的研究进展,并对其应用前景作了进一步的分析与展望。
2014年01期 v.18;No.76 55-59+89页 [查看摘要][在线阅读][下载 1511K] [下载次数：468 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：2 ] - 胡钱东;林强;石存斌;付小哲;李宁求;刘礼辉;吴淑勤;
约氏黄杆菌属于黄杆菌科,黄杆菌属,是自然界中一种常见的环境微生物。约氏黄杆菌研究集中在降解机制和滑动机制上,并取得了一定的研究进展,同时在致病性上也有研究。概述了约氏黄杆菌的分类地位和生物学性状,并对其降解机制、滑动机制和引起的疾病进行了综述。目前,该菌全基因组测序已经完成,通过研究发现,其降解机制、滑动机制和致病机理三者间存在相关性。因此,联合研究三种机制可能成为以后研究的热点。
2014年01期 v.18;No.76 60-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 1570K] [下载次数：396 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 陈勇;柳亦松;曾建国;
近年来,随着测序技术的不断发展,基因组测序技术渐趋成熟并在动物和植物基因组上获得了越来越多的成功,大量植物的基因组的草图和精细图不断地被公布出来。比较和分析了三代测序技术各自的特点,对测序前的准备、基因组组装、注释和比较基因组学等方面的研究进展进行了详细的评述,阐明了植物基因组研究的特点和难点。通过植物的全基因组测序,研究者不仅可以获得该植物基因组和重要功能基因的序列信息,为从分子水平研究植物的分子进化、基因组成和基因调控等提供了一定的依据,而且还对即将测序的植物基因组研究具有重要的借鉴意义。
2014年01期 v.18;No.76 66-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 1840K] [下载次数：4405 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：102 ] |[阅读次数：4 ] - 王丽;朱敏;杨明;桂明;
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种复杂的多基因自身免疫疾病,遗传因素在其中起重要作用;除了人类白细胞抗原基因之外,多种非HLA基因也通过各种途径参与SLE免疫紊乱,其不同多态性及单倍型背景可能通过差异性遗传学效应影响SLE的发生与发展,因而探索相关基因的作用机制、基因间相互关系及其表达调控的网络信号通路对于深入了解SLE致病机制,指导其风险评估,开展个性化诊疗及预后等极为关键,是未来SLE研究的重大方向。
2014年01期 v.18;No.76 75-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 1897K] [下载次数：153 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 马变颖;王梓;张彬;朱敏;刘静;
肺癌是当前最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率均逐年升高。肺癌对人类健康的危害日益加重,因此对肺癌诊断和治疗的要求更加迫切。肺癌的发生、发展涉及复杂的生物学过程,主要包括抑癌基因的失活和原癌基因的激活,因此深入了解与肺癌相关的基因的作用和机制很有必要。随着分子生物学的迅速发展,人们对肺癌中相关发病基因有了更深刻的认识,现就肺癌相关的抑癌基因(如p53、Rb、p16、LKB1、PTEN、4.1B/DAL-1、GPRC5A、GATA、PTPRO)作一简要概述。
2014年01期 v.18;No.76 83-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 1733K] [下载次数：1203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：1 ] - 李宗艳;郭荣;
物种濒危的本质是在自然状况下,种群难以更新和维持。而导致濒危的内在原因就是由于物种的生物学、遗传学因素影响了种群的丰富度。繁殖是种群构建、更新和维持的关键环节,而繁殖成功的标准是能产生成熟个体。从繁殖生物学角度总结木莲属濒危种产生成熟个体的关键环节的研究状况,从其生殖发育异常、交配系统研究、物种自然繁殖特性及个体生存力角度探讨物种致濒的原因。
2014年01期 v.18;No.76 90-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 1696K] [下载次数：615 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：33 ] |[阅读次数：1 ]